小鼠β-聯(lián)蛋白（β-Catenin）ELISA試劑盒檢測原理

小鼠β-聯(lián)蛋白（β-Catenin）ELISA試劑盒檢測原理

實驗原理：                                     

將目標抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入微生物化的目標抗體，將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后，加入HRP標記和親和素，再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

試劑盒操作步驟：

實驗所需自備試驗器材：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

實驗結(jié)果計算：

繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

技術小提示：

1. 當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。

2. 為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

3. 每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準確性。

4. 混合后的顯色底物在上板前應為無色，請避光保存；假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍色。

5. 終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍變黃；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻；請充分混合。

產(chǎn)品有效期：6個月